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大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)
BS-3177 大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒
以下是關(guān)于大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū),綜合了多個(gè)來(lái)源的操作步驟和注意事項(xiàng):
一、試劑盒組成
預(yù)包被板?:96孔或48孔微孔板,已包被抗Casp-9抗體?。
標(biāo)準(zhǔn)品?:凍干粉形式,需用稀釋液復(fù)溶,濃度通常為2000 pg/mL,需倍比稀釋成梯度濃度?。
檢測(cè)溶液?:包括生物素標(biāo)記抗體(檢測(cè)溶液A)、酶標(biāo)二抗(檢測(cè)溶液B)?。
洗滌液?:30倍濃縮液,需用蒸餾水稀釋?。
顯色底物(TMB)與終止液?:避光保存,顯色后需立即終止反應(yīng)?。
二、樣本處理
血清/血漿?:采集后室溫靜置10-20分鐘,離心(2000-3000 rpm,20分鐘)取上清,避免溶血或脂血?。
組織勻漿?:按重量比加入PBS勻漿,離心后取上清,分裝保存于-20℃?。
細(xì)胞上清?:離心去除顆粒,凍存前避免反復(fù)凍融?。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
加樣?:
每孔加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣本(建議復(fù)孔),隨后加入50μL生物素標(biāo)記抗體?。
37℃孵育1小時(shí),洗滌3次(手工操作或洗板機(jī))?。
酶標(biāo)反應(yīng)?:
加入80μL親和鏈酶素-HRP,37℃孵育30分鐘,再次洗滌?。
顯色與終止?:
每孔加入底物A/B各50μL,避光孵育10分鐘,立即加入50μL終止液?。
讀數(shù)?:
使用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度?。
四、注意事項(xiàng)
試劑保存?:未開(kāi)封試劑盒-20℃保存,開(kāi)封后酶標(biāo)板需密封防潮,TMB和終止液需4℃避光?。
操作規(guī)范?:避免泡沫產(chǎn)生,加樣時(shí)需精準(zhǔn);洗滌需,防止非特異性結(jié)合?。
質(zhì)量控制?:建議每次實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白孔和復(fù)孔,標(biāo)準(zhǔn)曲線R值應(yīng)≥0.95?。
樣本要求?:反復(fù)凍融不超過(guò)3次,組織樣本需新鮮處理或液氮速凍?。
五、常見(jiàn)問(wèn)題
顯色異常?:可能因酶標(biāo)抗體失效或洗滌不充分,需檢查試劑有效期和操作步驟?。
背景過(guò)高?:封閉不或樣本中干擾物質(zhì)過(guò)多,可優(yōu)化封閉液濃度或稀釋樣本?。
注:以上資料僅供參考,不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù),具體操作請(qǐng)以實(shí)際試劑盒說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)或咨詢品牌商?。
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