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大鼠白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒實驗使用說明書
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BS-2887 大鼠白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒
一、實驗原理
該試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法,通過包被抗IL-2R抗體的微孔板捕獲樣本中的IL-2R,再依次加入生物素標記抗體、HRP標記鏈霉親和素和底物TMB顯色,顏色深淺與IL-2R濃度成正比?。
二、試劑盒組成
預包被微孔板(96孔或48孔配置)
IL-2R標準品(通常含6管梯度濃度)
生物素標記抗體、HRP標記鏈霉親和素
顯色液(TMB A/B液)和終止液
20×濃縮洗滌緩沖液
樣本稀釋液和封板膜?
三、樣本處理要求
血清/血漿?:采集后需離心(2000-3000g,15-20分鐘),-20℃保存避免反復凍融?。
細胞培養(yǎng)上清?:離心去除沉淀后分裝保存?。
組織勻漿?:需用PBS沖洗后勻漿,離心取上清?。
四、操作步驟
標準品稀釋?:按說明書梯度稀釋(如400ng/L至25ng/L)?。
加樣?:每孔加入50μL標準品或樣本(建議設復孔)?。
孵育?:37℃孵育60-120分鐘,洗滌3-5次?。
顯色?:加入TMB避光顯色15分鐘,終止后450nm測OD值?。
五、注意事項
試劑使用前需平衡至室溫,避免底物接觸強光?。
洗滌需(建議浸泡1-2分鐘/次),避免交叉污染?。
不同批次試劑不可混用,標準品稀釋后需丟棄?。
顯色時間需嚴格控制,終止后15分鐘內(nèi)完成檢測?。
六、數(shù)據(jù)計算
以標準品濃度為橫坐標、OD值為縱坐標繪制標準曲線,通過回歸方程計算樣本濃度?。
七、常見問題
高背景?:可能因洗滌不充分或封閉不足導致?。
無信號?:檢查酶活性或抗體效價?。
重復性差?:需確保操作一致性和試劑新鮮度?。
注:以上資料僅供參考,完整操作請以實說明為準,不同品牌可能存在細節(jié)差異?。
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